Jak zrobic bufor

Witam
Mam pytanie,moze niektorym z Was wyda sie glupie,ale ja nie mialam juz dawno kontaktu ze sporzadzaniem roztworow i wiele rzeczy mi umknelo.
Jak mam sporzadzic 900µl buforu o pH 7,4. Wiem ze mam uzyc 100 mM Tris, 150 mM NaCl, 1mM CaCl2 i 0,5mM MgCl2. Jak obliczyc ile µl poszczegolnych skladnikow potrzebuje?
Bardzo prosze o pomoc,nawet na innym przykladzie

a w Maniatis nie mozesz sprawdzic? tam sa przepisy od poczatku do konca

a moglaby mi podac jakiegos linka? bo jak wpisuje w google to mi tylko szapmony do wlosow wyskakuja

a mozesz podac nazwe buforu to pojde i zobacze w ksiazce?

Problem polega na tym ze mam tylko w przepisie podane "staining buffer: 100 mM Tris, pH 7,4 150 mM NaCl, 1 mM CaCl2, 0,5 mM MgCl2"
A do swojej proby potrzebuje 900 µl tego buforu.
Dziekuje za odzew i mam nadzieje ze mi pomozesz

no dobra, a masz te poszczegolne skladniki o takich stezeniach? noi skad taki dziwny przepis?

Skladniki mam.A przepis jest z protokolu dla barwnika.Wystarczy jesli mi napiszesz przynajmniej jak obliczyc dla jednego skladnika.Na tej podstawie poradze sobie z reszta.

Witam Was ponownie
Juz wiem jak zrobic taki bufor. Takze gdyby ktos byl tak madry jak ja i zapomnial jak to sie przelicza to podaje:
Np masa molowa Tris to 158 g/mol, czyli 0,1 M to 15,8 g. To 15,8 g przypada na 1 l roztworu,czyli na 900 µl jest x.
Pozdrawiam Was serdecznie

100 mM Tris, 150 mM NaCl, 1mM CaCl2 i 0,5mM MgCl2 to są stężenia końcowe czy początkowe?


Przygotowując bufory nie robi się tak jak napisałaś. Zwłaszcza jeśli przygotowujesz tylko 900ul. Przygotowujesz sobie najpierw każdy ze składników w wyższym stęzeniu czyli np 1M Tris i go rozcieńczasz a wszystko obliczasz ze wzoru C1 x V1 = C2 x V2!!!


Jeśli zrobisz tak jak piszesz będziesz miała duże błędy w stężeniu.

i nie zapomnij że jeśli używasz Trisu to pH mierzy się zawsze na drugi dzień.

Dzięki bardzo za odpowiedz. A nie wiesz czasem jak długo taki bufor może być używany?

Jesteś absolwentką biotechnologii i nie potrafisz przeliczać stężeń i robić roztworów?

a ja mam pytanie coż jest złego w metodzie Karli i czemu uzyskamy w ten sposób niedokładne stężenia

a i jeszcze jedno, czemu pH buforu z TRISem mierzymy na drugi dzień:> w moim labie nikt tego nie praktykuje:>
sama też zrobiłabym to w ten sposób, będe wdzięczna za odpowiedź

Najprawdopodobniej chodzi o błąd pomiaru. Przy tak małych ilościach nawet jedno ziarenko robi nieraz różnicę. Przygotowanie większej próby, a potem jej rozcieńczenie, daje dużo większą wiarygodność stężenia.


w WCO też nie Ale w wielu miejscach już się spotkałem z taką opinią.

pH Trisu mierzy się zawsze na drugi dzień ze względu na to że pH Trisu po jednej nocy od przygotowania roztworu z proszku potrafi zmienić się bardzo bardzo mocno.

Przygotowałem raz Tris pH 7,5 a gdy zmierzyłem pH na drugi dzień okazało się że wynosiło 9,5. To ogromna różnica. Zawsze mierzcie pH na drugi dzień. W ogóle Tris nie ma zbyt dobrych właściwości buforowych i łatwo zmienia pH zwłaszcza pod wpływem temperatury

Jeśli zależy wam na utrzymaniu stałego pH polecam zamiast Trisu użyć HEPES.

Cześć bardzo proszę o pomoc w przygotowaniu (tzn jak go zrobić krok po kroczku) buforu mając do dyspozycji:

8% SDS M=288,38 g/mol
40% glicerol
40mM Tris M=121,14g/mol
4 mM EDTA M=372,2g/mol
320mM DTT M=154,2g/mol
0,2% bromofenol blue M=670,00 g/mol

Ma być 50ml lub 25ml buforu o pH=7,0

Bardzo proszę o pomoc bo jutro mam go przygotować a nie mam pojęcia jak
Pozdrawiam!