3` RACE czy mozna na odwrót?

Witam,
od jakiegoś czasu zmagam się z dosekwenjonowaniem końca 3` i w daleszej kolejności końca 5` genu u kilku roślin. Mam kit 3`RACE. Standartowa procedura jest taka ze namnaza sie totalne cDNA uzywajac poliT primera ze specyficznym koncem. Zaleta tego jest taka ze zasadniczo dostaje sie pule wszystkich cDNA genow ktore maja koniec poliA a potem uzywajac specyficznego primera do wybranego genu otrzymujemy wlasciwy produkt PCR genu. To teria. Praktyka na razie bez sukcesow. Zastanawiam sie czy skoro nie zalezy mi na puli cDNa wszuystkich genow nie mozna zrobic inaczej - zaprojektowac primer komplementarny do sekwenji mRNA z 3 ` końcem w kierunku końca 3` transkyptu tego genu i uzyc go do namnozenia cdNa tylko tego genu a potem w reakcji PCR dolozyc nie poliT primer ale poli A. W teorii polimeraza i primer nie jest zuzywany wowczas na namnozenie totalnego cDNA a jedynie od razu wyselekcjonowanego genu. Podnosze wowczas specyficznosc metody. Nie wiem czy ktos tak robił już
Co o tym sądzicie>?

O ile dobrze pamiętam wykłady z inż.gen., powinno to zadziałać. Pozdrawiam!

dzięki za odp chyba sprubuję

Daj znać, czy się udało - warto, żeby inni dostali odpowiedź na podstawie praktyki, a nie czyjegoś gadania ;D

ok
chociaż na razie w standardowy sposób nagle ruszyło i zaczęło działać. Ale brakuje mi jeszcze dwóch genów także nie wykluczone ze jednak przetestuje podejście odwrotne.