Synteza cDNA - startery

Odpowiedz  Forum BioTechnolog.pl » Laboratorium
Autor Wiadomość
jou_anna
Posty: 7
Wysłany: 15.08.2009, 17:25:11
witam wszystkich biotechnologów

mam krótkie pytanie skierowane do osób posiadających doświadczenie w syntezie cDNA na bazie całkowitego RNA - jakiego rodzaju primerów używacie w reakcji, gdy uzyskany materiał ma posłużyć analizie ekspresji genów w reakcji qRT-PCR. Wybieracie random primers czy raczej oligo-dT

pozdrawiam
i z góry dziękuje za odpowiedzi

micropoint
Posty: 126
Wysłany: 26.08.2009, 14:29:56
hej
Jeśli interesuje Cie tylko jeden gen to najlepiej wyłowić go za pomocą specyficznego primera. Jeśli chcesz analizować więcej genów to standardowo wykorzystuje się oligodT i to działa całkiem dobrze. Randomicznych hexamerów czy dekamerów nie używałem. Jeśłi spojrzysz na komercyjne dostępne cDNA to widać że większość z nich syntetyzowana była z użyciem oligodT. to jest o tyle dobre że dostajesz raczej homogenną pulę cDNA. Z drugiej strony stosowanie randomicznych primerów wzbogaca cDNA o fragmenty z kompletnymi końcami 5'

Strona 1 z 1