Ukierunkowana mutageneza - overlap extension.

Czy ktos moze wie jak zrobic takie zadanie:
Trzeba zaprojektowac startery, ktore umozliwia wprowadzenie mutacji punktowej do danego genu(nizej) i wklonowanie zmodyfikowanego genu do wektora pET(sekwencja tez nizej):
sekwencja genu:(wklonoowana do innego plazmidu, duze litery - miejsca ciec enzymow restrykcyjnych, male litery - nasz gen - nie podam calego, tylko poczatek i koniec, mutacja ma byc w srodku - w nawiasie zamiana gta na gtt):

GCCGCCATTGCTGCCAACCATC atg tga gtt cga tga gta --gen-- att gtt utt cgt atg gtt (gta) atc tgc atg act --gen---gtg cag tgg taa CTCGAGTACCGCCTTATTCCAAT


TERAZ PODAM FRAGMENT PLAZMIDU DO KTOREGO MAM WKLONOWAC GEN Z MIEJSCAMI CIEC DLA ENZYMOW RESTRYKCYJNYCH, KTORE CHCE WYKORZYSTAC PRZY KONSTRUOWANIU PRIMEROW - TYLKO JAK TO ZROBIC??:


------GEN-----CATATGCTCGAGGATCCGGC----GEN---


MIEJSCA CIEC DLA ENZYMOW:
DLA 1:

C'ATATG
GTATA'C

DLA 2:

C'TCGAG
GAGCT'C


DODAM, ZE MIEJSCE CIECIA DLA 2 ENZYMU WYSTEPUJE TEZ NA KONCU GENU W 1 PLAZMIDZIE, CZY MOZNA TO WYKORZYSTAC??
Bede wdzieczna za odpowiedzi, pozdrawiam