Rejestracja i Regulamin
Profil
FAQ
Szukaj
Mapa
Studenci
Zaloguj
Mam do Was pytanko, a w zasadzie kilka;) Otóż muszę oczyścić genomowe DNA buraka z pozostałości RNA. Do tego celu chcę użyć RNA-zy A tylko zastanawiam się jakiej firmy? DNAGdańsk, Fermentas, Sigma? Jakie są Wasze doświadczenia?
Jednej rzeczy nie rozumiem. Zapewne dla wielu banalnej, ale trudno. W procedurze RNA-zowania mam użyć 10ul RNA-zy o stężeniu 10 mg/ml. Czyli mówić najprościej jak się da - zamawiam RNAzę A o steż. 10mg/ml i dodaję 10ul tego enzymu, tak? Trochę się pogubiłam, gdy w charakterystyce produktu odkryłam, że robocze stężenie RNazy wynosi 1-100 µg/ml w zależności od zastosowania. zastanawiam się czy muszę zrobić rozcieńczenie/stock roboczy i dopiero na nim pracować? Czyli biorę 10ul z zakupionego enzymu i dodaję 990ul buforu 50 mM Tris-HCl (pH 7.4) lub TE i dopiero z tego 10ul do prób?
Druga kłopotliwa dla mnie kwestia to aktywność specyficzna tego enzymu. Jedna firma podaje, że ich enzym ma aktywność specyficzną: >2500 u/mg białka (>50 Kunitz u/mg białka), zaś druga,że >5000 u/mg protein (>100 Kunitz units/mg protein) a mają równe stężenia. Który enzym lepszy? Rozumiem,że o wyższej aktywności?
Ostatnia sprawa:
Enzym otrzymuję w formie lizatu. Zaleca się rozpuszczanie liofilizatu w buforze 50 mM Tris-HCl (pH 7.4) lub w buforze TE i przechowywanie w temperaturze +4oC. Po dodaniu 50% glicerolu (v/v) można przechowywać w temperaturze -20oC.
Czyli jeżeli rozpuszczę sobie mój otrzymany lizat w 500ul TE to dodaję 500ul 50% glicerolu i mogę przechowywać w -20oC, mając stężenie 10mg/ml?
Dzięki za wszelkie uwagi oświecające Waszą forumową koleżankę, pozdrawiam
