problem z otrzymaniem lizatu z HeLa do translacji

Wysłany: 27.01.2010, 16:01:28

Witam Wszystkich!

Mam problemy z otrzymaniem aktywnego translacyjnie lizatu z zawiesinowej hodowli komórek HeLa. Dotąd lizowałam komórki metodą zamrażania-rozmrażania w obecności inhibitorów proteaz, ale pomimo obecności białek w lizacie, nie otrzymywałam żadnych produktów w reakcji translacji in vitro. Wiem, że ludzie powszechnie używają szklanego homogenizatora Dounce'a do tego celu, ale nie wiem jaka objętość (2ml czy więcej) i inne wymiary homogenizatora byłyby najlepsze. Może ktoś z Was poda mi jakieś namiary (firmę lub numer katalogowy) na odpowiedni homogenizator lub jakieś wskazówki czy protokoły do otrzymywania lizatu z HeLa do translacji in vitro?

Z góry wielkie dzięki

Serdecznie pozdrawiam

Aga